控制菌檢查法

供試品的控制菌檢查應按已驗證的方法進行，增菌培養基的實際用量同控制菌檢查方法的驗證。

陽性對照試驗 供試品進行控制菌檢查時，應做陽性對照試驗。陽性對照試驗的加菌量為10~100cfu，方法同供試品的控制菌檢查。陽性對照試驗應檢出相應的控制菌。

陰性對照試驗 取稀釋液 10m1 照相應控制菌檢查法檢查，作為陰性對照。陰性對照應無菌生長。

陰性對照試驗 取稀釋液10m1照相應控制菌檢查法檢查，作為陰性對照。陰性對照應無菌生長。

控制菌檢查采用培養基稀釋法時，可加大增菌培養基的用量。

基本程序∶

供試液制備 → 增菌培養 → 選擇性培養基培養 → 挑取疑似菌落 → 生化試驗 → 報告結果

1.大腸菌群的檢查

取含適量（不少于 10m1）的膽鹽乳糖發酵培養基管3支，分別加入1∶10 的供試液lml（含供試品0.1g 或0.1m1）、1∶100的供試液lml（含供試品0.01g或0.OIml）、1∶1000的供試液lml（含供試品0.001g 或0.001ml），另取1支膽鹽乳糖發酵培養基管加入稀釋液lml作為陰性對照管。培養 18～24小時。

膽鹽乳糖發酵管若無菌生長、或有菌生長但不產酸產氣，判該管未檢出大腸菌群;若產酸產氣，應將發酵管中的培養物分別劃線接種于曙紅亞甲藍瓊脂培養基或麥康凱瓊脂培養基的平板上，培養18～24 小時。

若平板上無菌落生長，或生長的菌落與表2所列的菌落形態特征不符或為非革蘭陰性無芽孢桿菌，判該管未檢出大腸菌群;若平板上生長的菌落與表 2 所列的菌落形態特征相符或疑似，且為革蘭陰性無芽孢桿菌，應進行確證試驗。

                             表2 大腸菌群菌落形態特征

確證試驗 從上述分離平板上挑選4～5個疑似菌落，分別接種于乳糖發酵管中，培養 24～48小時。若產酸產氣，判該膽鹽乳糖發酵管檢出大腸菌群，否則判未檢出大腸菌群。根據大腸菌群的檢出管數，按表3報告 1g 或lml供試品中的大腸菌群數。

                           表3 可能的大腸菌群數表

                       注∶+代表檢出大腸菌群;一代表未檢出大腸菌群。

2.梭菌檢查

取供試液 10ml（相當于供試品1g、lml）2份，其中1份置80℃保溫 10分鐘后迅速冷卻。上述 2份供試液直接或處理后分別接種至 100ml的新鮮庖肉培養基中。各培養基管在厭氧條件下培養72～96小時。如試驗管不出現渾濁、產氣、消化碎肉、臭氣等現象，判供試品未檢出梭菌;否則，應取上述培養物0.2m1，涂抹接種于含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂培養基平板上，在厭氧條件下培養 48～72小時；若平板上無菌落生長，判供試品未檢出梭菌;若平板上有菌落生長，應挑選2~3個菌落分別進行革蘭染色和過氧化氫酶試驗。

過氧化氫酶試驗 取上述平板上的菌落，置潔凈玻片上，滴加3%過氧化氫試液，若菌落表面有氣泡產生，為過氧化氫酶試驗陽性，否則為陰性。

若上述可疑菌落為革蘭陽性梭菌，有或無卵圓形或球形的芽孢，過氧化氫酶陰性，判供試品檢出梭菌，否則判供試品未檢出梭菌。

結果判斷

供試品檢出控制菌或其他致病菌時，按一次檢出結果為準，不再復試。

供試品的**數、霉菌和酵母菌數其中任何一項不符合該品種項下的規定，應從同一批樣品中隨機抽樣，**復試兩次，以3次結果的平均值報告菌數。

眼用制劑檢出霉菌和酵母菌數時，須以兩次復試結果均不得長菌，方可判供試品的霉菌和酵母菌數符合該品種項下的規定。

若供試品的**數、霉菌和酵母菌數及控制菌三項檢驗結果均符合該品種項下的規定，判供試品符合規定;若其中任何一項不符合該品種項下的規定，判供試品不符合規定。